2025年 03期

Improvement of Hydrazinolysis Method and Its Application in Identification of Carbon-terminal Amino Acids of Polypeptide Chain


摘要(Abstract):

为了解决传统肼解法操作过程中碳末端氨基酸难以分离的问题,基于传统肼解法提出一种改进的方法测定碳末端氨基酸。采用水合肼肼解不同水解度的酪蛋白酶解液,分别利用庚醛和苯甲醛去除氨基酸酰肼,通过薄层层析法、高效液相色谱法测定2种方法获得的碳末端氨基酸并进行t检验。结果表明:采用庚醛和苯甲醛去除氨基酸酰肼得到的碳末端氨基酸溶液中均含有赖氨酸、鸟氨酸,氨基酸含量随着水解度的增大而增加,而且不同方法得到的赖氨酸、鸟氨酸含量无显著性差异(p>0.05),验证了改进肼解法的可行性,确定胰蛋白酶对酪蛋白中精氨酸、赖氨酸具有定向酶解作用。

关键词(KeyWords):肼解法;酪蛋白;碳末端氨基酸;胰蛋白酶;定向酶解

基金项目(Foundation):山东省重点研发计划项目(2022CXGC010602)

作者(Author): 韩文玉,李凯,魏旭,李宝瑞,王元秀

DOI: 10.13349/j.cnki.jdxbn.20250319.001

参考文献(References):

[1] 朱梦媛,李冲伟.植物源功能肽的制备、 生理活性与应用研究进展[J].食品科学,2021,42(17):364.

[2] DAROIT D J,BRNDELLI A.In vivo bioactivities of food protein-derived peptides:a current review[J].Current Opinion in Food Science,2021,39:120.

[3] 于弋涵,杜伟宁,胡秋辉,等.酶法水解猴头菇多肽的生物活性[J].食品科学,2021,42(21):122.

[4] AKABORI S,OHNO K,NARITA K.On the hydrazinolysis of proteins and peptides:a method for the characterization of carboxyl-terminal amino acids in proteins[J].Bulletin of the Chemical Society of Japan,1952,25(3):214.

[5] OHNO K.On the structure of Lysozyme.III:on the carboxy-terminal petide[J].The Journal of Biochemistry,1955,42(6):615.

[6] NAKAKITA S,SUMIYOSHI W,MIYANISHI N,et al.A practical approach to N-glycan production by hydrazinolysis using hydrazine monohydrate[J].Biochemical and Biophysical Research Communications,2007,362(3):640.

[7] KUSAMAK.On the species difference in carboxy-terminal amino acids of serum albumins from various animals[J].The Journal of Biochemistry,1957,44(6):375.

[8] BRADBURY J.The hydrazinolysis of insulin,lysozyme,wool proteins and wool[J].Biochemical Journal,1958,68(3):482.

[9] 周佳,朱书强,李雁,等.酸水解法-全自动氨基酸分析仪测定不同种类蜂蜜中氨基酸含量及其分析[J].中国蜂业,2023,74(5):45.

[10] 段姗姗,董志.HPLC测定门冬氨酸鸟氨酸注射液的含量[J].华西药学杂志,2014,29(4):480.

[11] 孙慧娟,王瑞,宋芊芊,等.基于超快速液相色谱-质谱联用技术检测药食两用薄荷中氨基酸和核苷类成分[J].食品与发酵工业,2020,46(8):261.

[12] 朱静怡,范春婷,陆慧媛,等.毛细管电泳在蛋白质及其水解产物分析中的应用及进展[J].食品安全质量检测学报,2022,13(18):5855.

[13] 苗会娟,徐艳梅,郝丽娟,等.柱前衍生-高效液相色谱法测定脑蛋白水解物中多肽含量[J].化学分析计量,2023,32(11):36.

[14] 刘伯业.小麦蛋白低苦味肽的制备及其脱苦机理研究[D].无锡:江南大学,2017:6.

[15] 张玉霞,梁琼,黎渊珠,等.胰蛋白酶水解制备绿豆分离蛋白多肽的工艺[J].食品工业,2021,42(5):54.

[16] NEDKOV P,GENOV N.A method for identifying C-terminal amino acids as their DNS-derivatives obtained after the hydrazinolysis of peptides[J].Biochimica et Biophysica Acta,1966,127(2):544.

[17] 秦娟娟,何超群,刘金龙,等.酪蛋白的胰蛋白酶水解物分离及其抗氧化性研究[J].中国酿造,2019,38(11):103.

[18] 贾芳.低苦味大豆肽的研制及其在饮料中的应用[D].郑州:河南工业大学,2016:15.

[19] KAWANISHI Y,IWAI K,ANDO T.Determination of C-terminal arginine and asparagine of proteins by catalytic hydrazinolysis[J].The Journal of Biochemistry,1964,56(4):315.

[20] 李静.大球盖菇富含氨基酸呈味物质开发关键技术研究[D].合肥:安徽农业大学,2021:12.